Il a disputé 147 rencontres pour l'Albiceleste avec qui il a atteint la finale du Mondial 2014, perdue contre l'Allemagne (0-1). En 2004 et 2008, il avait remporté l'or olympique avec l'Argentine.

En club, l'ancien milieu défensif a porté les couleurs de River Plate, West Ham, Liverpool et Barcelone. Avec le Barça, il a remporté 19 titres dont 5 championnats d'Espagne et 2 Ligues des Champions. Mascherano a ensuite terminé sa carrière sous le maillot de l'Estudiantes en Argentine.